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放大字体  缩小字体 发布日期:2024-02-28  来源:上海源叶生物科技有限公司
核心提示:聚丙烯酰胺凝胶电泳 可用于蛋白和寡核苷酸的分离,最常用于蛋白质的分离,这里总结了dna电泳的各种浓度page胶配制的配方及制

聚丙烯酰胺凝胶电泳 可用于蛋白和寡核苷酸的分离,最常用于蛋白质的分离,这里总结了dna电泳的各种浓度page胶配制的配方及制备方法。

聚丙烯酰胺 凝胶电泳简称为page(polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,这一聚合过程需要有自由基催化完成。

各种浓度page胶的配制(dna电泳用)

50ml体系:

丙烯酰胺

有效分离(bp)

二甲苯青

溴酚蓝

丙烯酰胺30%(ml)

10×tbe(ml)

ddh2o(ml)

temed(µl)

过硫酸铵10%(µl)

3.5%

100-1000

460

100

5.83

5

39.17

25.0

250

5.0%

100-500

260

65

8.33

5

36.67

25.0

250

8.0%

60-400

160

45

13.33

5

31.67

25.0

250

12.0%

40-200

70

20

20.0

5

25.00

25.0

250

15.0%

25-150

60

15

25.0

5

20.00

25.0

250

20.0%

5-100

45

12

33.33

5

11.67

25.0

250

5ml体系:

丙烯酰胺

丙烯酰胺30%
(ml)

10×tbe
(ml)

ddh2o
(µl)

temed
(µl)

过硫酸铵10%
(µl)

3.5%

0.583

0.5

3.917

2.5

25

5.0%

0.833

0.5

3.667

2.5

25

8.0%

1.333

0.5

3.167

2.5

25

12.0%

2.00

0.5

2.5

2.5

25

15.0%

2.50

0.5

2.0

2.5

25

20.0%

3.333

0.5

1.167

2.5

25

1、丙烯酰胺30%为29:1(质量比,丙烯酰胺:双甲叉丙烯酰胺)

2、temed 可以加到1ul/ml。

不同浓度丙烯酰胺和dna的有效分离范围表

丙烯酰胺(%)

有效分离范围(bp)

溴酚兰*

二甲苯青*

3.5

100~2000

100

460

5.0

80~500

65

260

8.0

60~400

45

160

12.0

40~200

30

70

15.0

25~150

15

60

20.0

10~100

12

45

*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链dna分子 所含碱基对数目(bp).

凝胶的制备过程:

1、 按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。

2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60°。

3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。

4、 加入temed后,立即混匀,缓缓倒入两玻璃板间的胶床中,直到液体接近溢出时为止。

5、 立即插入适当的梳子,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会。

6、 室温聚合一小时后,将玻璃板插入电泳槽中,上紧,倒入0.1xtbe缓冲液。

7、 小心取出梳子,加样。

大家可以根据自己试验中dna片段大小的不同选择配制合适浓度的丙烯酰胺胶。page胶配制过程中记得避免气泡的产生。

 

编辑:songjiajie2010

 
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