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放大字体  缩小字体 发布日期:2024-02-23
核心提示: 紫外分光光度计是我们实验室常用的定性、定量仪器,是我们检测及科研必不可少的设备,用了这么多年的老搭档你了解它吗?今
 紫外分光光度计是我们实验室常用的定性、定量仪器,是我们检测及科研必不可少的设备,用了这么多年的老搭档你了解它吗?今天小编就跟你好好分析一下,紫外分光光度计的干货,一起看看吧。
01
仪器的预热问题

在一般分光光度计的使用说明书上,要求仪器预热时间约20分钟;若是带微处理器的分光光度计,开机后仪器自动进入自检(初始化)状态,约需10分钟左右。

 

在分光光度计预热这个环节上,很多使用者或多或少存在问题,如开机只预热电路系统 (不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等。

 

对带微处理器有自检功能的分光光度计,开机后仪器自检 (初始化)结束后,在测定窗口上,设置所需波长值, 用一个吸收池装上纯净水置于光路上,调 “0000a”后,预热仪器,当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。

 

对于紫外可见分光光度计,由于有双光源 (钨灯与氘灯),为了延长灯的使用寿命,开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。

02
吸光度测定重复性的问题

分光光度计在测定过程中,发现同一个溶液在不同时间里其测定结果不同,即重复性不好,其原因是什么?排除测定错误因素外,可能原因有:
(1)仪器预热时间不够或预热方法不对所造成,应延长预热时间或采用正确的预热方法。
(2)光电转换器 (如光电管)因长时间使用其光电转换 效率发生了变化导致。这时标准溶液与待测溶液的吸光度都 同样变低,在相对定量时对结果影响很小。但是对这类仪器,一般建议连续使用时间不应超过3h,若需长时间使用,最好间歇30min 。

01
比色皿

样品室的主要作用就是放置样品,液体测试一般使用比色皿,比色皿分为石英和玻璃两种,玻璃比色皿主要用于可见区(320nm-2500nm),在紫外区有吸收,不适用于紫外区,石英比色皿可以用于紫外可见近红外区(190nm-2500nm),另外有些透明有机玻璃也可以用作吸收池。

01
如何区分比色皿

(1)比色皿上方通常会有字母标识,各型号标识稍有差别,玻璃比色皿口沿处有“g”(glass 玻璃) ,而石英比色皿口沿处有“q”(quartz 石英) 或者 “s”(silicide石英玻璃)。

(2)使用紫外可见光分光光度计来鉴别玻璃、石英比色皿:现行国家检定规程规定石英比色皿在250nm下吸光度应小于0.07abs,若吸光度大于0.07abs 则为玻璃比色皿。

02
如何配对比色皿

使用需要配对的比色皿,在可适用的相同波长下,以空气或者纯水为介质,使用透光率t进行测量,将每组比色皿中的一只透射率调为100%,然后测量另外一只透光率,凡透射率之差不超过0.5%t,即可配对使用。

03
如何清洗比色皿

比色皿是分析过程中对结果有很大影响的一个因素,比色皿污染之后对测试的影响更大,会使测试不稳定甚至结果不准,因此完成样品测定之后,必须彻底清洗比色皿,下列清洗流程仅供参考:蒸馏水清洗——乙醇清洗——干燥。

如果比色皿被污染,请按照如下流程清洗:在洗涤剂中浸泡约10min(30-50℃)——蒸馏水清洗——再加有少量双氧水的稀硝酸中浸泡约30min——蒸馏水清洗——干燥。 

 注:如果比色皿被有机物污染,请先用如丙酮等有机溶剂将有机物洗去并用蒸馏水清洗。

值得注意的是:分析实验常用的铬酸洗液不宜用于比色皿洗涤,这是因为带水的比色皿在该洗液中可能会产生热量,致使比色皿胶接面裂开而损坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还可能残存微量铬(铬在紫外区有吸收) ,因此会影响实验的测定。

 

03
使用注意事项

1、使用的吸收池必须洁净,并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。

2、取吸收池时,手指应拿毛玻璃面的两侧,装盛样品以池体的4/5为度,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净,晾干防尘保存。

3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外,其吸收度以在0.3~0.7之间为宜。

4、测定时除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用1cm石英吸收池,在规定的吸收峰±2nm以内,测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰位置是否正确,并以吸收度最大的波长作为测定波长,除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。

5、供试品应取2份,如为对照品比较法,对照品一般也应取2份。并进行平行操作,每份结果与平均值的偏差应在±0.5%以内。

6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽。

04
日常维护及保养

1、若实验中需大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。

2、指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况,需进行机械调零。

3、比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。

4、操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率。

5、一般的分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本身的特点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光 电信号,而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移,灵敏度下降。针对其上述特点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下,因此在 预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。

6、放大器灵敏度换挡后,必须重新调零。

7、比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下:

分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液,把仪器置于某一波长处。 将某一个池的透射比值调至100%,测量其它各池的透射比值,记录其示值之差及通光方向,如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用,若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。

编辑:songjiajie2010

 
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