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放大字体  缩小字体 发布日期:2006-05-15
3m大肠杆菌/大肠菌群快速检验测试片操作以及判读
一、测试大肠杆菌/大肠菌群 操作方法  
1、未开封时,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。 2、已开封的,将封口以胶带封紧。
3、保存再封的袋于≤25℃(≤77℉)和温度<50%,不要冷藏已开启的包装袋,并于一个月内使用完。 4、制备1:10和更大稀释的食物样品稀释液,称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、whirlpak bag或者其他灭菌容器内.

5、加入适量的无菌稀释液,包括buffered peptone buffer(idf phopsphate buffer ,用0.0425g/l的kh2po4调ph7.2) 、0.1%的蛋白胶水(iso方法6887) 、缓冲蛋白胶水(iso方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.

但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

 

6、搅拌或均质样品
酸性样品的稀释液用innaoh调ph6.5-7.5,对碱性样品的稀释液用in hcl调ph6.5-7.5。
7、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。 8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、细心将上层膜缓慢盖下,避免有气光泡产生,切勿使上层膜直接落下。 10、使用压板(平面底朝下)放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。 12、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。
13、测试片的透明面朝上,可堆叠至20片,对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。 14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数,并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落作进一步鉴定,即掀起上层膜,由培养胶上挑取单个菌落。  
二、测试大肠杆菌/大肠菌群 判读方法  

petrifilm coliformtm coliform测试片含有vrb培养剂 (violet red bile),一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂,可增强菌落计数效果。绝大多数e .coli(约占97%)能产生-葡萄糖甘酸酶与培养基中的指示剂反应,产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围,表面覆盖的胶膜,可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体,约有95%的大肠杆菌产生,形成蓝色或深蓝上菌落并有气泡相连接,气泡大小约为1个菌落直径。

aoac和fda细菌学分析手册(ram)规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌,发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在petrifilm cc测试片上生长产酸,ph指示剂使培养基颜色变深,在红色菌落周围有气泡者,为大肠菌群细菌。大肠杆菌鉴定,在不同国家可以有变更(见培养时间和温度部分指示)。

该测试片不能单独测定e.coli o157,像大多数其他e.conliform培养基一样,它没有专门指示是否有任何0157菌株的存在.
aoac确认的方法:
e.coli=49(蓝色菌落带有气泡)
total coliform=87(红色和蓝色菌落带有气泡)
no growth=0
注意图2到8 培养基颜色的变化,随着e.coliform菌数增多,培养基颜色变成暗红色或蓝紫色,背景的泡(沫)为培养基现象,不是大肠杆菌或大肠菌群生长结果,见方框1.
e.coli connt=13
total coliform count=28
petrifilm ec测试片菌落数适宜计数范围是15-150,不要计算圆形培养基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈!
e.coli count=3
任何蓝色菌落(蓝色到红蓝色)表明有e.coli存在,正面照明增强形成蓝色沉淀菌落的测定,圆圈1示为背面光照的红蓝菌落,圆圈2示为同一菌落的正面光照蓝色沉淀更明显些.
e.coli count=17
estimated total coliform count =150
测试片面积约为20cm2,当菌落数超过150 个,为了估计菌落数可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2 )计算平均菌落数,再乘以20方可得到整个测试片上的菌落数
actual count~106
petrifilm ec测试片菌落无法计数时至少有下列现象之一:
1.很多小菌落
2.有许多气泡
3.培养基的颜色变深,由红色到蓝紫色
actual count~108
高数量的大肠杆菌可以引起长生区变成蓝紫色.
presumptive e.couli count~8
estimated total coliform count~108
当大肠菌群数>108 时,一些大肠杆菌菌株可能产生少量气体和不明确的蓝色菌落.所有不带气泡的蓝色菌落和(或)蓝色环带,推定为大肠杆菌需计数,如有必要需挑取不带气泡的蓝色菌落,进行确认试验.
actual count~108
当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,petrifilm ec 测试片培养基颜色呈黄色.
total coliform count=3
食物颗粒为不规则形状,且不带气泡.
total coliform count=78
气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2.
人为气泡可能是不当的操作所致,或是来自样品内的气体,它们成不规则形状,且不与菌落相连接.见圆圈3

例如1-10示为不同形状气泡与菌落连接情况,所有菌落应记数。
 
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