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放大字体  缩小字体 发布日期:2006-05-15
 
3m大肠菌群快速检验测试片操作以及判读
一、测试大肠菌群 操作方法  
1. 未开封时,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。 2. 已开封的,将封口以胶带封紧。
3. 已启开的包装袋不要冷藏并于一个月内使用完。 4. 制备食物样品稀释液,称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、whirlpak bag或者其他灭菌容器内.
5. 加入适量的无菌稀释液,包括buffered peptone buffer(idf phopsphate buffer ,用0.0425g/l的kh2po4调ph7.2) 、0.1%的旦白胶水(iso方法6887) 、缓冲旦白胶水(iso方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

6、搅拌或均质样品.

样品的稀释液调ph6.6-7.2对酸性样用in naoh、碱性样用inhci调ph。

7、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。 8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、细心将上层膜缓慢盖下,避免有气光泡产生,切勿使上层膜直接落下。 10、使用压板(平面底朝下)放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。 12、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。

14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数,并可参考计算菌落数。

15、可以分离菌落作进一步鉴定,即掀起上层膜,由培养胶上挑取单个菌落。
13、测试片的透明面朝上,可堆叠至20片。培养时间和温度因方法而有不同,最通用的认可方法是:
总大肠菌群
aoac官方方法986.33和989.10(乳/生乳和其它乳制品)
大肠菌群:32℃±1℃培养24±2h
aoac官方方法991.14(食品类)
大肠菌群:35℃±1℃培养24±2h
nmkl方法(147.1993)
大肠菌群:37℃±1℃培养24±2h
afnor认可方法3m 01/2-09/89a和b(除水生贝壳类动物外的所有食品)
大肠菌群:30℃±1℃培养24±2h

耐热的(粪)大肠菌群
afnor认可方法,3m 01/2-09/89c(所有食品) 44℃±1℃培养24±2h。当提高培养温度时,培养箱应有一定的湿度是需要的。
 
二、测试大肠菌群 判读方法  

petrifilm coliformtm coliform测试片含有vrb培养剂 (violet red bile),一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂,可增强菌落计数效果。表面覆盖的胶膜,可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。

aoac和fda细菌学分析手册(ram)规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌,发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在petrifilm cc测试片上生长产酸,ph指示剂使培养基颜色变深,在红色菌落周围有气泡者,为大肠菌群细菌。

大肠菌群签定,在不同国家可以有变更
(见培养时间和温度部分提示).

aoac确认的方法:
total coliform= 69 (有气泡的菌落)
no growth=0
注意图2到图5培养基颜色的变化,随着coliform 菌数增多,培养基颜色变深,背景的泡(沫)
为培养基现象,不是大肠菌群生长结果.
total coliform count=79
petrifilm cc 测试片菌落数适宜记数范围是15-150,不要计算圆型培基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈1
estimated total coliform count=220
测试片面积约为20cm2,当菌落数超过150个,为了估计菌落数可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2)计算平均菌落数,在乘以20方向得到整个测试片上的菌落数.
菌落太多时需进一步稀释样品,方能获得准确计数.
tntc(菌数太多无法计数)
petrifilmcc测试片菌落无法计数时至少有下列现象之一.(1)很多小菌落(2)有许多气泡(3)培养的颜色深暗.
acrual coun=4
当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,petrifilmcc测试片培养基颜色呈黄色.
total coliform count=2
食物颗粒为不规规则形状,且不带气泡.
total coliform count=8
气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2,人为的气泡可能是不当的操作所至,或是来自样品捏的气体,他们成不规则形状,且不与菌落相连接.见圆圈3.
例如,1-10示为不同类型气泡与菌落的连接情况,所有菌落应计数.
 
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