食品伙伴网服务号
放大字体  缩小字体 发布日期:2006-05-15
3m快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以及判读
一、测试金黄色葡萄球菌数 操作方法  
1、未拆封包请冷藏于≤8℃,并在保存期限内使用完。在高温度的环境中可能出现冷凝水,最好在拆封前将整包回温至室温。 2-3、已开封时,将封口已胶带封紧,存放于25℃/湿度50%以下,并于一个月内使用完. 请勿将已开封包冷藏于冰箱
4、使用无菌的容器置入样品,已备将样品作10倍或更大倍数的稀释。 5、加入适量的无菌稀释液:butterfield s phosphate buffer(idf phosphate buffer,0.0425g/l of kh2po4 adjusted to ph 7.2),0.1%peptone water ,people saltdiluent (iso method 6887),saline solution (0.85-0.90%),bisulfite-free letheen broth,或无菌蒸馏水。 不可用buffered peptone water 或buffered 含有citrate ,bisulfite,or thiosulfate ;它们可能抑止菌生长。
6、搅拌或均质样品。 调整样品稀释液的ph值至6.5-7.5。请以1n naoh调整酸性产品ph值,以1n hci调整碱性产品。 7、将测试片放置在平坦的外表面,揭起上层膜。使用吸管将1ml样品垂直低在测试片的中央处。
8、小心卷会上层膜,避免气泡进入。不要让上层膜直接盖回。 9、使用压板放置在上层膜中央处。轻轻的压下,是样品液均匀覆盖于圆形的培养面积上。且勿扭转或滑动亚板。拿起亚板,静置1分钟以使培养基凝固。
10、测试片的透明膜朝上可堆叠至10片,培养于35℃+1℃或37℃+1℃下,24+2小时。 11、培养之后,菌落可能生长,但在检测片上看不到,因为指示剂是含在金黄色葡萄球菌检测反应片上。
12、检测片移至36℃+2℃培养箱,培养1-4小时。注意:如果菌落需要进一步测试,检测片培养不要超过一个小时。 13、使用无菌镊子取出圆形的反应片,再掀开检测片上层膜小心置入反应片。在江上层膜放下。
14、为了确定反应片与培养胶均匀接触及避免夹带任何气泡,可以使用一个弯曲的玻璃棒(l玻璃棒)轻压检测片。 15、将已置入反应片的金黄测葡萄球菌检测片培养于35℃+1℃或37℃+1℃,1-3小时。
16、可目视或使用菌落计数器并可参读判读卡计算菌落数。 17、菌落可以分散做为进一步的鉴定,掀起上层膜,有培养胶上挑起菌落。
二、测试金黄色葡萄球菌数 判读方法  
快速金黄色葡萄球菌检验测试片(petrifilm rsn)由两部分组成,第一部分是金黄色葡萄球菌培养基片,次检验片含有修正baird-pdker 营养物几一冷水可溶解的胶质,第二部分是热安定核酸酶(tnase)反应片,包含有dna,toludine rsn-o(甲苯胺篮)及四唑指示剂(terazolium),此一指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌热安定核酸酶的存在.

热安定核酸酶是一种金黄色葡萄球菌的酵素产物,在高温下能维持稳定, 热安定核酸酶的检测象凝固酶反映一样,是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法. 在petrifilm rsn 检测片上,热安定核酸酶反应看起来像是粉红色环带包围着的一个红色、或篮子菌落.

petrifilm rsn 检测片必须与petrifilm热安定核酸酶反应片一起使用,单独使用将不会显示菌落,因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上,而不是在petrifilm rsn检测片上。

s.aureus count=22
本图片显示一个典型的petrifilm rsa检测片上的金黄色葡萄球菌的菌落,计算所有粉红色环带的菌落既是s.aureus,菌落可能是红色或蓝色.
s.aureus count=0
图2显示一个置人petrifilm 热安定核酸酶反应片的petrifilm rsa 检测片,在这检测片上看不到菌落或热安定核酸酶环带.
s.aureus count=4
热安定核酸酶反应的一种指示剂造成金黄色葡萄球菌呈红色菌落,第二种指示剂使得热安定核酸酶环带显示粉红色.
s.aureus count=36
因为有些金黄色葡萄求菌只生产少量的热安定核酸酶,所以无论大小计算所有的tnase环带菌落为金黄色葡萄球菌.
petrifilm rsa 检测片上tnase环带的适当计数范围大约是15-100个菌落.计数范围高低端视 金黄色葡萄球菌生产tnase环带量的多寡及其他菌相生长状况.
s.aureus count = 38
有些金黄色葡萄球菌产生大量的热安定核酸酶.这一类的金黄色葡萄球菌,于最后一阶段培养时,只需30分钟培养既可计算.因为已形成可目测的tnase环带.
注意:图4与图5有大约相同的菌落数.至于tnase环带大小的差异,可能来自菌株的不同或最后阶段培养时间长短的差异.
estimated s.aureus count = 150
petrifilm 图形的生长面积大约30平方公分.可以 估算方式,先数三个方格内粉红色环带的数量,在乘以10,即为所有在图形培养范围内的菌落数.
s.aureus count = tntc
当大量的金黄色葡萄球菌出现时,粉红色tnase 环带可能重叠造成整个检测片变成粉红色.
图7显示一个检测片中,因菌落过多无法计数(tntc).建议进一步稀释样品来鉴定正确的菌落数.
s.aureus count = 3
偶尔水化培养基的菌株会长在检测片上.他们呈不规则形的红色菌落,而且周围无粉红色tnase环带.亦不视为金黄色菌落但无粉红色tnase环带,亦不视为金黄色葡萄球菌(如圆圈2).
若有大的食物颗粒存在,反应片不易与培养基均匀秘合,易造成圆形范围边缘产生气泡(如圆圈3).
s. aureus count = 15
食物颗粒是不规则形状可能呈红,蓝或绿色(如圆圈4).
当二个金黄色葡萄球菌生长的相当靠近的时候,会导致其tnase 环带.计数时,请视为二个菌落(如圆圈5).
 
分享:
[ 网刊订阅 ]  [ 仪器设备搜索 ]  [ ]  [ ]  [ ]  [ ] [ ]
 

 
 
推荐图文
推荐仪器设备
点击排行
 
 
processed in 0.055 second(s), 17 queries, memory 0.9 m
网站地图