食品伙伴网服务号
放大字体  缩小字体 发布日期:2005-11-18
一、硅胶基质填料
1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(nh2,aps)和氰基团(cn,cps)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(sioh)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(hexane),氯仿(chloroform),二氯甲烷(methylene chloride)等。
2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:c18(ods)、c8(mos)、c4(butyl)、c6h5(phenyl)等。
二、聚合物填料 聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要优点是在ph值为1—14均可使用。相对于硅胶基质的c18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
三、其它无机填料 其它hplc的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途。如,石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在hplc流动相中不会被溶解,这类柱可在任何ph与温度下使用。氧化铝也可以用于hplc。氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在ph高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用。新型色谱氧化锆基质填料也可用于hplc。商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用ph1-14,温度可达100℃。由于氧化锆填料是最近几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行之中。
怎样选择填料粒度 目前,商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3和5um填料进行。填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压。粒度越小,柱压越大,柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用。在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3um的色谱柱的背压却是5um的2倍。与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱,即相同的塔板数或分离能力,但是柱长更短,以缩短分析时间。另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力。
 
分享:
  • 下一篇:
  • 上一篇:暂无
[ 网刊订阅 ]  [ 仪器设备搜索 ]  [ ]  [ ]  [ ]  [ ] [ ]
 

 
 
推荐图文
推荐仪器设备
点击排行
 
 
processed in 0.028 second(s), 17 queries, memory 0.9 m
网站地图