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放大字体  缩小字体 发布日期:2024-04-09
核心提示: 样品的稀释固体和半固体样品 称取25 g置盛有225 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min均
 
样品的稀释

固体和半固体样品

 

称取25 g置盛有225 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min均质1min~2 min,或放入盛有225 ml稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2 min,制成1:10的样品匀液。

 

液体样品

以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。

上步完成后,用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。

移液过程使用的器具,都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪,核查洗耳球无菌程度,避免移液枪触及均质袋或试管内壁……

样品匀液完成后,可按相同操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。

根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1 ml样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

之后,及时将15 ml~20 ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

培养和计数


样品稀释完成后,就要进行培养和菌落计数了

待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。

 

如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基 (约4ml),凝固后翻转平板,按相同条件进行培养。

 

培养完成后,就要进行菌落计数了,计数可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units, cfu)表示。

 

选取菌落数在30 cfu~300 cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 cfu的平板记录具体菌落数,大于300 cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

 

大片菌落

其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。

链状生长

当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

 

 

结果与报告

 

为了生成结果和报告,需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是,对于菌落数量不同的培养皿,计数原则有所不同。 

若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。

称重取样以cfu/g为单位报告,体积取样以cfu/ml为单位报告。


编辑:songjiajie2010

 
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